疫情期间pcr实验室净化工程要求

　　新冠肺炎核酸检测PCR实验室

　　通常医院检验科和病理科等科室使用的实验室为生物安全二级（BSL-2）实验室。但新冠病毒核酸检测用PCR实验室则不同，《医疗机构发热门诊临床实验室能力建设专家共识（2020 版）》说明：对于用于新冠病毒检测的PCR实验室（以下简称“PCR实验室”）选址宜设置在发热门诊内，且建筑标准宜满足加强型医学BSL-2实验室标准。

　　《医学生物安全二级实验室建筑技术标准》T/CECS 662-2020则对加强型医学BSL-2实验室建筑技术要求进行了规定。《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》对PCR实验室布局和流程进行了明确规定。

　　《关于印发医疗卫生机构检验实验室建筑技术导则（试行）的通知》则对检验实验室建筑技术做出了整体要求。下面结合上述四部规范相关要求和实际建设的PCR实验室案例对建设要点进行梳理

   一、1PCR实验室应合理选址和布局

　　标准的PCR实验室一般分为四个区，一区为试剂准备区，二区为标本制备区，三区为PCR扩增区，四区为产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。场地一般要求在80平米以上，此标准PCR实验室可开展包括新冠病毒在内的常规分子检测项目。而如今市面上绝大部分新冠病毒检测试剂盒是在荧光定量PCR平台上开发的，因此没有产物分析区也不会影响新冠病毒的检测，60-80平米的场地就能满足要求，但是其他如基于一代测序与基因芯片的检测项目就无法开展。

　　PCR实验室应合理规划检验人员

　　PCR实验室标本制备室的生物安全要求最高，检验人员进入该区域缓冲间前需要在更衣室穿防护服，实验结束后在缓冲间脱掉防护服，因此需要设置更衣室和合理规划进出实验室动线。

　二、PCR实验室气流组织应符合定向气流原则

　　气流组织应有利于室内气流由被污染风险低的空间向被污染风险高的空间流动，最大限度减少室内回流与涡流。通风空调系统应保证各工作区的空气不产生交叉污染。

　　实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。

　　标准制备区要保持负压

　　标本制备区为实验室核心工作区，其主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。取样时病毒还未灭活，且在取样操作时，容易造成气溶胶扩散。为保护人员安全，必须在生物安全柜内操作，防止标本气溶胶的扩散。此后，标本经过灭活处理，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使操作人员在对样本进行检测时相对安全，但是病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。后续操作时主要防止含有病毒核算的气溶胶污染造成“假阳性”现象。因此，该区会产生污染源物，该区对缓冲间和试剂准备室保持负压，负压值小于扩增分析室。

　　三、核酸检测实验室建设的几个关键点

　　1、平面布局：不论是组合式还是分散式布置的PCR实验室，各功能房间均宜设置独立缓冲间。

　　2、区域空气流向：为避免交叉污染，PCR实验室空气流向必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。

　　3、通风空调：为避免交叉污染，各功能用房内空气不能掺混。混合式PCR实验室应采用新风直流空调系统，当采用新风系统有困难时，各区域的空气只能在自己的房间内循环。

　　4、生物安全：按照新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）的规定，2019-nCoV病原体暂按照第二类病原微生物进行管理，则样本植被区宜为负压或加强型P2实验室，核酸操作应在生物安全柜内进行。

　　关键技术措施包括：

　　*绝对负压（避免室内潜在污染外泄）

　　*气流组织（室内定向流，从低污染风险区流向高污染风险区）

　　*排风无害化处理（高效过滤、高空排放）

　　四、核酸检测实验室气流组织建议

　　1、气流组织宜采用上送下排，送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到最小程度。

　　2、在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附件不得设送风口

　　3、高效过滤器排风口应设在室内被污染风险最高的区域，单向布置，不得有障碍；

　　4、不能以回（排）风夹墙代替排风直管，排风高效过滤装置与排风总管的连接必须全部是实体风管。